漢坦病毒酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）IgG 實驗
發(fā)布時間：2014-3-8 9:49:54??????瀏覽次數(shù)：
漢坦病毒酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）IgG 實驗
（3）緩沖液：
包被液：pH9. 6 碳酸緩沖液；
稀釋液：pH7.4 PBS（含5%脫脂奶）
洗滌液：pH7.4 PBS－T（0.05％吐溫－20）；
（4）顯色液：A/B 液
（5）終止液：4N H2SO4
（6）酶標板、酶標儀。
檢測步驟：
（1）將待檢血清用稀釋液從1：100 開始作2 倍連續(xù)稀釋，加入抗原孔，
100μl/孔，同時設陰、陽性對照，37℃水浴1 小時；
（5）棄去血清，用洗滌液洗滌5～6 次；
（6）加酶結(jié)合物，用稀釋液按工作濃度稀釋，100μl/孔，37℃水浴1 小時；
（7）棄去酶標抗體，用洗滌液洗滌6 次，甩干；
（8）加顯色液：于各反應孔內(nèi)加A/B 液各一滴，37℃，避光3～5 分鐘；
（9）加終止液于每反應孔，一滴/孔。
結(jié)果判斷：
于450nm（TMB）陽性對照孔OD 值/陰性對照孔OD 值，即P/N≥2.1，對照成
立；若待檢血清孔OD 值與陰性對照孔OD 比值≥2.1，則標本為出血熱IgG 抗體
陽性，反之陰性。（陰性對照孔OD 值小于0.05 按0.05 記，若大于0.05 按實際
數(shù)值計算）
意義：
陽性結(jié)果，表明曾受到漢坦病毒感染，>1：100 有診斷參考意義；
恢復期血清抗體滴度比急性期抗體滴度有4 倍或4 倍以上升高則可確診.
試驗材料：
（1）純化的重組漢坦病毒核蛋白抗原預包被酶標板：
（2）辣根過氧化物酶標記的抗人IgG 抗體；（3）緩沖液：
包被液：pH9. 6 碳酸緩沖液；
稀釋液：pH7.4 PBS（含5%脫脂奶）
洗滌液：pH7.4 PBS－T（0.05％吐溫－20）；
（4）顯色液：A/B 液
（5）終止液：4N H2SO4
（6）酶標板、酶標儀。
檢測步驟：
（1）將待檢血清用稀釋液從1：100 開始作2 倍連續(xù)稀釋，加入抗原孔，
100μl/孔，同時設陰、陽性對照，37℃水浴1 小時；
（5）棄去血清，用洗滌液洗滌5～6 次；
（6）加酶結(jié)合物，用稀釋液按工作濃度稀釋，100μl/孔，37℃水浴1 小時；
（7）棄去酶標抗體，用洗滌液洗滌6 次，甩干；
（8）加顯色液：于各反應孔內(nèi)加A/B 液各一滴，37℃，避光3～5 分鐘；
（9）加終止液于每反應孔，一滴/孔。
結(jié)果判斷：
于450nm（TMB）陽性對照孔OD 值/陰性對照孔OD 值，即P/N≥2.1，對照成
立；若待檢血清孔OD 值與陰性對照孔OD 比值≥2.1，則標本為出血熱IgG 抗體
陽性，反之陰性。（陰性對照孔OD 值小于0.05 按0.05 記，若大于0.05 按實際
數(shù)值計算）
意義：
陽性結(jié)果，表明曾受到漢坦病毒感染，>1：100 有診斷參考意義；
恢復期血清抗體滴度比急性期抗體滴度有4 倍或4 倍以上升高則可確診.
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